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（22分）Ⅰ、抗菌肽是生物体内广泛存在用来抵御外来病原体的一类小分子蛋白质。它具有广谱抗菌活性。请回答下列问题：
（1）从免疫调节的方式上，抗菌肽的作用属于________免疫。研究发现，抗菌肽可以在细菌细胞膜上穿孔而成离子孔道，从而改变细菌细胞膜的________，导致细菌死亡。
（2）采用基因工程的方法人工合成抗菌肽时，首先根据其氨基酸排列顺序，用________
________的方法获得家蚕抗菌肽基因，该基因与家蚕体内原有的基因相比不具有。
（3）将该基因与________结合导入大肠杆菌细胞中，再将重组大肠杆菌置于适宜条件下培养，当大肠杆菌的群体生长处于________期时，细胞内会大量积累抗菌肽，这时就可以分离提取抗菌肽。
Ⅱ、右图是对一位患有胃瘘的妇女所进行的临床实验结果。
实验Ⅰ让该妇女吃麦片粥，但该妇女明显对麦片粥厌恶；
实验Ⅱ让该妇女吃自选喜欢的食物如新鲜蔬菜、炸鸡腿、蛋糕等。两次实验中食物经咀嚼后都没有进入胃内。
（1）实验Ⅱ胃液分泌量高于实验Ⅰ，说明________会影响
低级神经中枢对胃液分泌的调节作用。
（2）把食物通过胃瘘灌入该妇女胃内，一段时间后有胃液分泌；若阻断神经联系，食物在胃内仍能引起少量胃液分泌，该实验结果说明________。
（3）有人提出了胃泌素的假说，认为胃黏膜可分泌一种物质——胃泌素，能影响胃液的分泌。请探究胃泌素的作用。
①主要实验材料和用品：小鼠若干只、0.9%生理盐水、胃黏膜提取液。
②假设_________________________________________________。
③实验步骤
a．把生长发育相同的健康小鼠分成数量相等的甲、乙两组
b．甲组静脉注射一定浓度的胃黏膜液，乙组注射等量的0.9%生理盐水。
c．在相同且适宜的条件下饲养，观察并记录小鼠胃液的分泌状况。
④实验结果预测：
a．如果出现________，假设成立 。
b．如果出现，假设不成立 。
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防御素是一类具有抗菌活性的蛋白质，广泛存在于动物体中。有关说法错误的是
A.防御素参与机体的免疫调节，利于维持机体稳态
B.防御素高温变性后与双缩脲试剂作用不会产生紫色反应
C.加入NaCI后防御素会从溶液中析出，此过程不会造成其失活
D.防御素在细胞的核糖体上合成，破坏此细胞的核仁将影响防御素的形成
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抗菌肽通常是由短氨基酸序列构成的小分子肽，具有广谱抗菌活性，对病毒和癌细胞都有一定的杀伤力，科研人员将抗菌肽基因导入大肠杆菌细胞内获得了能高效表达抗菌肽的工程菌。请回答下列问题。
（1）利用PCR技术扩增抗菌肽基因时，设计的引物之间不能________，以避免引物自连。反应体系中，使模板DNA解旋的操作方法是________，加入的Taq酶所起的作用是________。
（2）大肠杆菌含有许多蛋白酶，在制备抗菌肽目的基因表达载体时宜选用分泌型载体。分泌型载体能将抗菌肽在信号序列的指引下运出细胞外，使用分泌型载体的突出优点是________。将基因表达载体导入大肠杆菌前，需要用________处理大肠杆菌制备________细胞。
（3）抗菌肽本身对大肠杆菌具有一定的杀伤性，对抗菌肽的分子构造进行改造，可得到对大肠杆菌杀伤性小的抗菌肽，该改造技术直接改造的对象是________。
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（7分） 干扰素是一类具有很高生物活性的糖蛋白，它具有抑制多种病毒的复制功能，是一种广谱抗病毒物质。下图为干扰素抑制病毒复制过程示意图，请回答相关问题。
（1）组成干扰素的基本单位是和 ________；组成干扰素基因的基本单位是
（2）从图示看，直接抑制病毒复制的原因是
（3）美国一家公司用转基因技术生产干扰素，首先从人的 细胞中提取目的基因，使之与细菌的质粒结合，这两步所用的工具酶为和 。然后移植到酵母菌体内，使干扰素基因在酵母菌中得以表达。
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抗菌肽具有热稳定性以及广谱抗细菌等特点，其广泛的生物学活性显示了在医学上良好的应用前景。科研工作者将若干编码抗菌肽（ABP）序列按照首尾相连的方式插在质粒PLG339的布康唑抗性基因内部，形成长度为4 800bp（1bp为一个碱基对）的重组质粒PLG339-nABP，相关过程如图所示。已知重组质粒中，每个编码ABP序列中都含有限制酶AccⅢ的一个切点，基因trpA的表达产物可使细胞利用无机氮源合成色氨酸（色氨酸是微生物生长必须的氨基酸）。请据图回答下列问题：
（1）质粒PLG339的基本单位是______。
（2）若PLG339-nABP经限制酶AccⅢ处理后，产生66bp和4140bp两种长度的DNA片段，单个抗菌肽（ABP）最多由______个氨基酸构成（不考虑终止密码）。
（3）现有大肠杆菌和酵母菌两种菌群，可作为导入PLG339-nABP的受体细胞是______，理由是______。
（4）若选定的受体细胞为trpA基因缺陷型，则需采用两步法筛选含重组质粒的细胞。第一步筛选的固体培养基在营养成分上的要求是：______，不含色氨酸；第二步采用“影印法”，将第一步所得菌落转移到新的培养基上进行培养，该培养基中应添加______。通过对照，最终选出能在第一步培养基上生长，而不能在第二步培养基上生长的菌落即为符合要求的成功导入重组质粒的细胞。
（5）在测试转基因表达产物ABP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果时获得了如图所示的结果，据此可获得的结论是：ABP抑菌效果与ABP的______和金黄色葡萄球菌的______有关。
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【生物——选修模块1：生物技术实践】（15分）
家蝇体内存在一种具有极强抗菌能力的抗菌蛋白，请回答下列有关分离和提取抗菌蛋白的问题：
（1）分离该抗菌蛋白可用________法，其原理是根据蛋白质分子的带电性质差异、大小及形状不同，________不同而实现分离。
（2）蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、________、________、和________。
（3）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白质的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛乳膏和蛋白胨主要为细菌生长提供________和________。
（4）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液，培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的___________，确定该蛋白质的抗菌效果。
（5）抗菌培养常用的接种方法有___________和_____________。实验结束后，对使用过的培养基应进行________处理。
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（15分）[生物技术实践] 科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。
（1）分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的________、大小及形状不同，在电场中的________不同而实现分离。
（2）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供________和。
（3）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的________，确定该蛋白质的抗菌效果。
（4）细菌培养常用的接种方法有________和________。实验结束后，对使用过的培养基应进行________处理。
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抗生素滥用导致的耐药性目前已成为一个严重的公共健康问题，近年来，“超级细菌”等事件的发生更显示出这一问题的严重性。抗菌肽（AMPs）是一类具有广谱抗菌性，而且其不易产生耐药性。为了改善抗菌肽的抗菌功能，常利用基因工程技术使抗菌肽在不同来源的宿主细胞内进行蛋白的重组表达。β-防御素是一种抗菌肽。构建β-防御素（β-defensin130）表达载体在大肠杆菌中表达。表达载体（PET-28a）和含有目的基因β-防御素（defensin130）的片段如下，结合已知条件回答下列问题：
（说明：Kanr和Ampr分别表示卡那霉素和氨苄青霉素抗性基因；promoter表示基因的启动部位）
（1）获得含有目的基因的重组DNA分子，需用___________和___________两种酶分别切割表达载体和含有目的基因的片段，并用___________酶将它们连接。
（2）把构建好的重组DNA分子导入到受体细胞，用适宜浓度的氯化钙处理受体细胞增加细胞壁的通透性的目的是___________。
（3）筛选含有目的基因β-防御素（β-defensin130）的受体细胞，先将菌液涂布在含有___________（抗生素）的培养基中培养，然后将所有菌落转移至含有___________（抗生素）的培养基中培养，最后挑选出目的菌落。
（4）在无菌操作下将目的单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，37°C培养24小时后，置于___________冰箱中保存。
（5）若受体细胞为双子叶植物，常用___________法将目的基因导入植物体细胞，再将体细胞进行组织培养，得到转基因植物。
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乳铁蛋白是一种糖蛋白，其具有广谱抗菌、抗病毒感染的作用。科研人员将人乳铁蛋白基因通过载体转入山羊ES细胞，最终成功培育出能产生人乳铁蛋白的转基因山羊。回答下列问题：
（1）利用PCR技术从cDNA文库中获取乳铁蛋白基因（基因序列未知），需根据乳铁蛋白氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是__________________。在PCR体系中需加入其中的_________（填“全部”、“任意1种”或“其中2种”）引物。
（2）山羊ES细胞可从囊胚的____________分离获得。从功能上看，该细胞具有____________。
（3）将人乳铁蛋白基因导入山羊ES细胞常用____________法。转化成功的ES细胞，体外培养过程中，通入CO2气体的目的是________________________。
（4）经鉴定，某转基因山羊产生的配子中有一半带有外源基因，请写出利用该山羊培育纯合转基因山羊的思路______________________________________________________。
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细胞因子（如TNF-a等）是由免疫细胞和某些非免疫细胞合成分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。甲类细胞因子促进B细胞增殖分化，促进免疫炎症反应，乙类细胞因子则抑制免疫炎症反应，这两类细胞因子相互作用，共同维持免疫应答的稳态。为研究类风湿性关节炎(RA)的发生与上述两类细胞因子的关系，分别测定了多例健康志愿者和RA患者血清中四种细胞因子的平均含量如下图。请分析回答：
(1)细胞因子引起的免疫属于 ___免疫（“特异性”或“非特异性”）。甲类细胞因子促进B细胞增殖分化成____。
(2)通过实验结果分析，属于甲类细胞因子的有 ___，属于乙类细胞因子的有 ____。
(3)结合甲、乙的作用分析，推测RA的发生可能是 ___导致的免疫失调。
