(10分)下图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图,请回答。
(1)图示技术名称为________ ,该技术的基础是___________技术。
(2)操作所用的成纤维细胞应在_____代以内;诱导融合运用了________原理, 该过程中区别于原生质体融合的方法是用________处理,。
(3)HAT培养基属于 ____培养基,其中需要加入________等天然物质。
(4)培养时PH一般为________ ;为操作中加人鸟本苷的目的是______。
(5)下表所示为杂交细胞A、B、C中存在的人类染色体及人类特有的4种酶(“+”表示存在,“-”表示不存在),这4种酶均为单基因编码产生,据表判断,编码________酶的基因位于染色体2上。
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【(10分)下图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图,请回答。
(1)图示技术名称为________ ,该技术的基础是___________技术。
(2)操作所用的成纤维细胞应在_____代以内;诱导融合运用了________原理,该过程中区别于原生质体融合的方法是用________处理。
(3)HAT培养基属于 ____培养基,其中需要加入________等天然物质。
(4)培养时PH一般为________ ;为操作中加入鸟本苷的目的是______。
(5)右表所示为杂交细胞A、B、C中存在的人类染色体及人类特有的4种酶(“+”表示存在,“-”表示不存在),这4种酶均为单基因编码产生,据表判断,编码________酶的基因位于染色体2上。
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(10分)下图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图,请回答。
(1)图示技术名称为________ ,该技术的基础是___________技术。
(2)操作所用的成纤维细胞应在_____代以内;诱导融合运用了________原理, 该过程中区别于原生质体融合的方法是用________处理,。
(3)HAT培养基属于 ____培养基,其中需要加入________等天然物质。
(4)培养时PH一般为________ ;为操作中加人鸟本苷的目的是______。
(5)下表所示为杂交细胞A、B、C中存在的人类染色体及人类特有的4种酶(“+”表示存在,“-”表示不存在),这4种酶均为单基因编码产生,据表判断,编码________酶的基因位于染色体2上。
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人的HPRT基因缺陷(HPRT-)细胞和小鼠的TK基因缺陷(TK-)细胞在HAT培养基中都不能存活。杂种细胞在分裂中随机丢失人的染色体,但保留所有的鼠染色体。因此,利用人—鼠细胞融合技术可以将人类基因定位于特定的染色体上。
(1)将人的HPRT-细胞与小鼠的TK-细胞用________促进融合,然后培养在________培养基(HAT)中,最终筛选出人—鼠杂种细胞。
(2)将存活下来的杂种细胞进行________培养,获得不同的细胞株,用________染色后镜检,观察结果如下:
细胞株编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
所含人染色体编号 | 11,14, 17,22 | 7,11, 14,17 | 5, 7, 17,21 | 2, 9, 11,17 | 5,17, 18,20 | 2, 5, 17,19 |
由此可推测________基因在________染色体上。
(3)如果要确定人鸟苷酸(UMP)激酶基因所在染色体,应选择UMP激酶缺陷的________(填“人”或“鼠”)细胞与相应细胞杂交,这样的方法________(填“能”或“不能”)对小鼠的基因进行定位。
(4)经过基因测序发现UMP激酶缺陷是因为编码它的基因中部的部分碱基替换造成的,结果可能导致( )
A.转录不能进行
B.合成的蛋白质分子缺少部分氨基酸序列
C.合成的蛋白质分子增加部分氨基酸序列
D.合成的蛋白质分子氨基酸数目不变
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人的HPRT基因缺陷(HPRT-)细胞和小鼠的TK基因缺陷(TK-)细胞在HAT培养基中都不能存活。杂种细胞在分裂中随机丢失人的染色体,但保留所有的鼠染色体。因此,利用人—鼠细胞融合技术可以将人类基因定位于特定的染色体上。
(1)将人的HPRT-细胞与小鼠的TK-细胞用________促进融合,然后培养在________培养基(HAT)中,最终筛选出人—鼠杂种细胞。
(2)将存活下来的杂种细胞进行________培养,获得不同的细胞株,用________染色后镜检,观察结果如下:
细胞株编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
所含人染色体编号 | 11,14, 17,22 | 7,11, 14,17 | 5, 7, 17,21 | 2, 9, 11,17 | 5,17, 18,20 | 2, 5, 17,19 |
由此可推测________基因在________染色体上。
(3)如果要确定人鸟苷酸(UMP)激酶基因所在染色体,应选择UMP激酶缺陷的________(填“人”或“鼠”)细胞与相应细胞杂交,这样的方法________(填“能”或“不能”)对小鼠的基因进行定位。
(4)经过基因测序发现UMP激酶缺陷是因为编码它的基因中部的部分碱基替换造成的,结果可能导致( )
A.转录不能进行
B.合成的蛋白质分子缺少部分氨基酸序列
C.合成的蛋白质分子增加部分氨基酸序列
D.合成的蛋白质分子氨基酸数目不变
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单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是 ( )
①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A.①②③④ B.①③⑤ C.②④ D.①③
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单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是( )
①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞
③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A.①②③④ B.①③⑤ C.②④ D.①③
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骨髓瘤细胞由于缺乏X酶,在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA,无法生长;而B淋巴细胞能产生X酶。某科研小组制备单克隆抗体的步骤如下:
①给小鼠注射特定抗原,一段时间后获取B淋巴细胞;
②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合后,诱导细胞融合;
③将融合后的细胞在HAT筛选培养液中培养,获得杂交瘤细胞;
④进行第二次筛选;
⑤体外培养,获得单克隆抗体。
回答下列问题:
(1)单克隆抗体最主要的优点是____________________________。给小鼠注射特定抗原的目的是使小鼠产生能分泌______________的B淋巴细胞。
(2)上述诱导细胞融合时,与诱导植物细胞融合不同的方法是使用______________处理。细胞融合依据的原理是细胞膜具有______________。
(3)利用HAT培养液筛选杂交瘤细胞的原理是:①骨髓瘤细胞之间两两融合后,由于_____________而无法生长;②B淋巴细胞之间两两融合后,由于_____________而无法生长;③杂交瘤细胞由于_________________,因而能生长。
(4)第二次筛选要获得的是_____________的细胞。
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将人、鼠细胞悬液混合并诱导细胞融合(只考虑细胞两两融合)后,在HAT培养基上,同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖。增殖过程中,细胞内人染色体随机丢失,只残留一条或几条。对处于分裂中期细胞的镜检结果如下表。下列叙述正确的是
A.在HAT培养基上,融合细胞均能存活和增殖
B.可以确定①的基因组成为TTTTHHhhhh
C.可以确定①②③的相关基因组成相同
D.可以将T(t)基因定位于人第17染色体
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杂交瘤细胞制备示意图如下。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT-),在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA,无法生长。据图回答下列问题:
(1)细胞融合的原理是_____________,诱导动物细胞融合特有的方法是__________________________。
(2)选择免疫B细胞是因为其_____________,且使杂交瘤细胞能在HAT培养液中生存。杂交瘤细胞制备利用了骨髓瘤细胞的_____________特点。杂交瘤细胞具备两种细胞的优势。
(3)利用杂交瘤细胞生产_____________抗体,还需要进一步的多次筛选,原因是_____________。
(4)将最终获得的杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或注射到_____________内增殖,一段时间后从相应的材料中获取抗体。
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小鼠体细胞含40条染色体,用小鼠的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,然后放入被32P标记的培养液中培养,当杂交瘤细胞进入第二次有丝分裂后期时,含31P标记的染色体条数是( )
A.40 B.80 C.120 D.160
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