科学家利用土壤农杆菌把编码霍乱毒素的无毒性β链的基因转移到苜蓿细胞，再将其培养成幼苗。动物...

科学家利用土壤农杆菌把编码霍乱毒素的无毒性β链的基因转移到苜蓿细胞，再将其培养成幼苗。动物食用这种苜蓿苗后，霍乱毒素β链很快被喉、肠胃等部位的分泌性粘液细胞吸收，从而刺激特异性抗体的大量产生，使机体获得对霍乱的免疫。其具体过程如下：

⑴从高效表达霍乱毒素β链的生物体中提取mRNA，通过____获得____用于PCR扩增，可得到大量含有霍乱毒素β链基因的DNA片段。PCR时需设计一对与霍乱毒素β链基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的____位点。设计引物时需要避免引物之间____而造成引物自连。

⑵将目的基因插入到土壤农杆菌Ti质粒的____上，通过农杆菌的转化，目的基因就能整合到苜蓿细胞的染色体DNA上，构建基因表达载体的目的是____。

⑶Ti质粒上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时应____，以防苜蓿体内生长素浓度过高而抑制苜蓿生长。

⑷欲检测苜蓿细胞内是否具有霍乱毒素β链，在分子水平上检测的方法是从转基因的苜蓿细胞中提取蛋白质，进行____。

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很久以前科学家在土壤中发现了苏云金杆菌能制造一种对昆虫有毒的蛋白质，当时许多人就想把编码这一蛋白质的基因(抗虫基因)转移到农作物中，以降低昆虫对农作物造成的危害。20 世纪90 年代，美国科学家采用基因工程技术首次培育出抗虫玉米新品种。主要培育过程如图：

（1）常用的MS培养基主要成分包括大量元素即　　________________ 　　 　　　　以及微量元素和　　　　，检验培养基中是否有杂菌污染最有效的方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）苏云金杆菌细胞中产生毒蛋白的场所是　　　　　　　　　 。

（3）目的基因导入后从愈伤组织形成完整植株的途径有两条（如下图），具体通过哪一条途径主要取决于培养基成分中_________

（4）愈伤组织是分化的细胞经过　　　　　　 形成的，具有较高的　　　　　　　 性。

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科学家运用转基因技术，将抗虫基因DXT转移到棉花细胞中培育出抗虫效果很好的优质棉花。下列说法不正确的是                                        （    ）

A．DXT基因来自于苏云金芽孢杆菌，其基因的编码区特点与酵母菌相同

B．DXT基因能在棉花细胞中正常表达，减少了农药的使用量和对环境的污染

C．转基因棉花培育过程中，可用土壤农杆菌的质粒作为运载体，还要用到植物组织培养技术

D．获得该基因常采用“鸟枪法”，要用到两种工具酶

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科学家运用转基因技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因DXT转移到大白菜细胞中，培育出抗虫效果很好的优质大白菜，减少了农药的使用量，减轻了农药对环境的污染。下列说法正确的

A．DXT基因的编码区由内合子和外显子组成

B．DXT基因能在大白菜细胞中正常表达

C．转基因大白菜培育的过程中，可以用灭活的病毒作为运载体

D．转基因大白菜能抵抗各种病害虫

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我国科学家成功地将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因转移到棉细胞内，培养出抗虫棉，在基因工程操作过程中，需要特定的限制酶切割目的基因和质粒。已知限制酶I识别序列和切点—G↓GATC—，限制酶Ⅱ识别序列和切点—↓GATC—；若在运载体质粒上有一段限制酶I的识别序列，在抗虫基因两侧各有一段限制酶Ⅱ的识别序列。下列相关叙述正确的是（　）

A．只能用同一种限制酶分别切割该质粒和目的基因

B. 用限制酶I切割质粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因，也能形成相同的黏性末端

C．因为抗虫基因编码区与棉细胞基因不同，要使其在棉细胞内成功表达需要对其编码区进行修饰

D．该质粒上无限制酶Ⅱ的识别序列，不能被限制酶Ⅱ切割

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采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的方法正确的是

①将毒素蛋白注射到棉受精卵中

②将编码毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中

③将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导入农杆菌，用该细菌感染棉的体细胞,

再进行组织培养

④将编码毒素蛋白的NDA序列与细菌质粒重组，借助花粉管通道进入受精卵

A．①②　　　　　　　　 B．③④　　　　　　　　　　 C．②③　　　　　　　　 D．①④

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图是利用基因工程和植物组织培养技术获得新植株的过程，请回答：

（1）农杆菌的 Ti 质粒分布在细菌细胞的___________中，图中 A 表示 Ti 质粒上的___________，且 A 可转移至受体细胞，并整合在___________ 上。Ti 质粒上必须含有___________ ，以便检测受体细胞中是否导入目的基因。

（2）C→D 过程，需要使用_____处理，使 D 处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态， 这种细胞称为_____。

（3）在植物中，一些分化的细胞，经过有关___________的诱导，脱分化为具有___________ 能力的薄壁细胞，进而形成植物的愈伤组织。愈伤组织在一定的培养条件下，又可以再分化出幼根和芽，形成完成的小植株。在此培养过程中，要求无菌操作的原因是：_____________________________

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（9分）苏云金杆菌合成的伴孢晶体蛋白经昆虫肠液消化后成毒性肽，可导致昆虫死亡。1993年，我国农科院成功地将苏云金杆菌伴孢晶体蛋白质基因转移到了棉花细胞内，培育出了转基因抗虫棉。

（1）转基因抗虫棉细胞中的抗虫基因通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿的方法获得。

（2）如果下图中的标记基因是质粒（作运载体）中唯一的标记基因，那么目的基因不能插入的位点是图中的＿＿＿＿处。（用图中的字母填写）

（3）要使运载体与抗虫基因连接，首先应使用＿＿＿＿＿＿＿＿进行切割。假如运载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该运载体连接的抗虫基因分子末端是＿＿＿＿＿＿＿＿。采用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿将运载体与抗虫基因连接，连接后得到的DNA分子称为＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（4）将连接得到的DNA分子导入土壤农杆菌，然后用该菌去感染棉花细胞，利用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的表达来检测目的基因已经成功导入。再利用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技术将受体细胞诱导成具有抗虫能力的棉花小植株。

（5）基因工程成功的标志是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的成功表达。

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35． 采用基因工程的方法培养抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是

36． ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中

②将编码毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中

③将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组导入细菌，用该细菌感染棉花体细胞，再进行组织培养

④将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，注射到棉花子房，并进入受精卵

A.①②          B.②③        C.③④         D.④①

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（12分）很久以前科学家在土壤中发现了某种细菌能制造一种对昆虫有毒的蛋白质，当时许多人就想把编码这一蛋白质的基因(抗虫基因)转移到农作物中，以降低昆虫对农作物造成的危害。20世纪90年代，美国科学家采用基因工程技术首次培育出抗虫玉米新品种。下图为这一转基因玉米的主要培育过程，分析回答下列问题：

（1）获得特定目的基因的途径除了从该细菌中直接分离抗虫基因外，如果基因较小，核苷酸序列又已知，也可以通过化学方法进行________。将目的基因与运载体结合时必须用________酶和DNA连接酶。在基因工程中，常用的运载体有________等。

（2）由转基因玉米细胞经过________形成愈伤组织，然后发育成胚状体和试管苗。若要制备转基因玉米的人工种子，可选择上述实验过程中的________再包裹合适的________等。

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