肺细胞中的let－7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let－7基因导入肺癌细胞实现了在细胞内表达。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答：
(1)获取let－7基因后可采用____________技术进行扩增，进行过程①时，将let－7基因与载体重组，需要的两类酶是____________________和______________。载体上RNA聚合酶识别和结合的部位称为__________。
(2)进行过程②时，如出现贴壁生长现象，可用__________酶处理，以利于传代培养。
(3)从细胞水平上，研究人员知道let－7基因成功表达的依据是__________________。
(4)进一步研究发现，let－7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可通过______________________________方法 ，以直接检测let－7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中____________(填“RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。
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研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答。
1）.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是________ ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。
2）.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是________。
3）.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________，这 两种酶作用的化学键都是________。
4）.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
5）.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是 ________ ________ 。
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研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答
1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是________ ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。
2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是________。
3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________，这 两种酶作用的化学键都是。
4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。________
5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是 ________ ________ 。
7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无ampR和tetR 的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是________________ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是_____________。
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肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
(1)进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为________。
(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取________进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中________(RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。
(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为________。
(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：
| 限制酶 | 片段及长度 |
| Hind Ⅲ | 2.5 kb，5.0 kb |
| Sma I | 2.0 kb，5.5 kb |
| Hind Ⅲ和Sma I | 2.5 kb，3.0 kb，2.0 kb |
可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有________个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为________的片段。
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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：
（1）进行过程①时，需用相关酶切开载体以插入let-7基因，该酶破坏的化学键是___________。重组载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为___________，同时，重组载体还应有___________以驱动自身复制以及___________以鉴别受体细胞是否含有目的基因。
（2）进行过程②时，当细胞生长到表面___________时，需用___________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行________________后继续培养。
（3）研究发现，let-7基因影响癌基因RAS表达的机理如图2所示。据图分析，肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________含量减少引起的，作出该假设的依据是_________________________。
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肺细胞中的let﹣7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let﹣7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图1．
请回答：
（1）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let﹣7基因．载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let﹣7基因转录，该部位称为 ．
（2）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养．
（3）研究发现，let﹣7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图2．据图分析，可从细胞提取 进行分子杂交，以直接检测let﹣7基因是否转录．肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的．
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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该技术基本流程如图１。
（１）进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为________。
（２）进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取________进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中________（RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。
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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。
请回答：
（１）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。
（２）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。
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(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。
请回答：
(1)进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 ________。
(2)进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图乙所示。据图分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中 (选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。
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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员在体外利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制，其影响机理如图，请回答下列问题：
（1）利用基因工程技术抑制肺癌细胞的增殖过程中，还需使用 技术。
（2）获取let-7基因后欲进行基因扩增应采用 技术，其依据的原理是 。
（3）基因表达载体构建过程中需使用的工具有 。将基因表达载体导入肺癌细胞的常用方法是 。
（4）根据图示分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。
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肺细胞中的let
7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答:
(1)进行过程①时,需用 酶切开载体以插入let7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let7基因转录,该部位称为 。
(2)进行过程②时,需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
(3)研究发现,let7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞中提取 进行分子杂交,以直接检测let7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中 (RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。
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